本发明公开了一种卡贝缩宫素的制备方法,所述的方法包括如下步骤:将Fmoc-Cys(Mmt)-OH与羟基官能团树脂偶联得到Fmoc-Cys(Mmt)-树脂。将Fmoc-Cys(Mmt)-树脂脱除Fmoc后得到H-Cys(Mmt)-树脂。将Fmoc-Asn(Trt)-OH与H-Cys(Mmt)-树脂偶联得到Fmoc-Asn(Trt)-Cys(Mmt)-树脂。按照固相合成的方法重复脱Fmoc、缩合反应的步骤,得到如A结构的多肽树脂。A脱Fmoc后,与溴代丁酸琥珀酰亚胺酯反应得到B;B经过弱酸裂解得到C,然后经环化、裂解得到如式D的片段;D经过强酸体系裂解得到E。将Fmoc-Gly-OH和氨基树脂混合后经偶联反应,脱Fmoc后得到H-Gly-树脂。按照固相合成的方法重复上述步骤得到F。将片段E与F偶联得到如式G的多肽树脂。G经裂解后得到卡贝缩宫素H。本发明方法总收率高,杂质含量少,产物纯度高,具有较大的产业化前景。
1.一种卡贝缩宫素的制备方法,其特征主要包括以下步骤:(1)以0.5-1.1mmol/g王树脂为载体、Fmoc保护的氨基酸为单体,依次连接Fmoc氨基酸,以Fmoc-Tyr(OMe)-OH为终止氨基酸,得到Fmoc-Tyr(OMe)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Mmt)-树脂片段A;(2)A经脱Fmoc后,与溴代丁酸琥珀酰亚胺酯反应得到B;B在1%-5%的TFA/DCM作用下得到C;然后C在树脂上环化得到D;D以TFA/TIS/EDT为切肽试剂、在乙醚中沉淀形成E;(3)以Rinkxa0amidexa0AM树脂为载体,Fmoc保护的氨基酸为单体,依次连接氨基酸,得到片段F;(4)E与F偶联得到G,G经裂解得到卡贝缩宫素粗品H;(5)将粗品溶于水,经过滤后通过制备HPLC进行分离纯化,得到卡贝缩宫素纯品;其中,化学物质A至H的化学结构如下所示:ntent="drawing" img-format="jpg" inline="no" orientation="portrait" wi="492"/>。
2.根据权利要求1所述的方法,以Fmoc保护的氨基酸为单体,依次与王树脂相连得到如式A的多肽树脂;采用偶联至多肽树脂上的缩合剂为下述缩合剂的一种或多种组合:DIC、HATU、TBTU、HBTU、PyBop、HOBt、Cl-HOBt、DIPEA、NMM、DIEA。
3.根据权利要求1xa0所述的方法,Cysxa0的侧链保护基为Mmt。
4.根据权利要求1xa0所述的方法,脱除Mmt保护基试剂为1%-5%TFA的DCM溶液。
5.根据权利要求1xa0所述的方法;H-Tyr(OMe)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Mmt)-树脂与溴代丁酸琥珀酰亚胺酯在选自由有机溶剂DCM,NMP和DMF组成的组中的至少一种溶剂中反应得到片段B。
6.根据权利要求1xa0所述的方法,环化反应在树脂上进行,所用的试剂为:二异丙基乙基胺,三乙胺,LiOH等。
7.根据权利要求1xa0所述的方法,采用E偶联至F肽树脂上的缩合剂为下述一种或多种组合:DIC、HATU、TBTU、HBTU、PyBop、HOBt、Cl-HOBt、DIPEA、NMM、DEPBT、DIEA。
8.根据权利要求1xa0所述的方法,以TFA/TIS/EDT为切肽试剂,其比例为90.0:5.0:5.0,最后在乙醚中沉淀得到卡贝缩宫素的粗品H。
9.根据权利要求1xa0所述的方法,以C18柱为填料柱,通过制备HPLC进行分离纯化,流动相为硫酸铵的水溶液和乙腈的混合液,检测波长为280mm。技术领域
本发明属于多肽药物制备方法领域,具体涉及一种卡贝缩宫素的制备方法。xa0
背景技术
卡贝缩宫素(Carbetocin)是一种化学合成的具有激动剂性质的长效催产素九肽类似物,其临床和药理特性与天然产生的催产素非常类似,卡贝缩宫素与子宫平滑肌的催产素受体结合,引起子宫的节律性收缩,在原有的收缩基础上,增加其频率和增加子宫张力。在非妊娠状态下,子宫的催产素受体含量很低,在妊娠期间增加,分娩时达高峰。因此卡贝缩宫素对非妊娠的子宫没有作用,但是对妊娠的子宫和刚生产的子宫具有有效的子宫收缩作用。目前国内只有原研厂家辉凌公司的进口药和辉凌中国的产品巧特欣,市场还处于保护期。xa0国外专利情况:xa0专利ES2115543,采用固液结合合成法:先通过常规的多肽固相合成法,采用HOBt/DIC偶联体系得到H-Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-Cys(Trt)-Pro-Leu-Gly-树脂,该肽树脂和4-氯丁酸缩合生成4-Cl-Butyl-Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-Cys(Trt)-Pro-Leu-Gly-树脂,经过酸裂解后得到线性肽4-Cl-Butyl-Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH₂,线性肽在乙腈和水(V:V=1:1)中用1Mxa0NaOH调节pH=9,环化得到卡贝缩宫素,环化采用的碱包括LiOH、NaHCO₃、DIEA、DMAP;国内专利情况:深圳瀚宇药业有限公司2009年申请了专利“一种固相制备卡贝缩宫素的方法”,专利号为CN10555272A。采用了Alloc保护半胱氨酸的巯基(Fmoc-Cys(Alloc)-OH),其它的氨基酸如下:Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Tyr(OMe)-OH。以Rinkxa0Amide氨基树脂为固相合成的载体,经过依次偶联原料氨基酸得到H-Tyr(Me)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Alloc)-Pro-Leu-Gly-氨基树脂,接着与X(CH₂)₃COOHxa0(X代表卤素,优选Br)反应得到Br-C(CH₂)xa0₂CONH-Tyr(Me)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Alloc)-Pro-Leu-Gly-氨基树脂,采用四三苯基膦钯/苯基硅烷/DCM脱除Alloc保护基得到Br-C(CH₂)xa0₂CONH-Tyr(Me)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys-Pro-Leu-Gly-氨基树脂,加入碱进行固相环化,得到卡贝缩宫素-氨基树脂,再经过裂解(裂解试剂是TFA/水/苯酚/乙二硫醇/苯甲硫醚)即可得到卡贝缩宫素粗肽,该粗肽通过离子交换柱的方法制备卡贝缩宫素衍生物(如卡贝缩宫素的醋酸盐、盐酸盐等)。xa0xa0xa0深圳键元医药科技有限公司在2010年申请了xa0“一种具有宫缩作用药物的生产工艺”的专利(CN102146122A)。在专利中采用保护的氨基酸Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Tyr(Me)-OH为原料,Rinkxa0Amidexa0MBHA为载体,通过TBTUxa0/HOBt/DIEA缩合得到Fmoc-Tyr(Me)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Leu-Gly-氨基树脂,以1%xa0TFA/DCM脱除半胱氨酸侧链保护,然后与4-溴丁酸在DIEA/DMF作用生成Fmoc-Tyr(Me)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys((CH₂)₃COOH)-Pro-Leu-Gly-氨基树脂。该肽树脂脱去Fmoc后,在TCTU/DIEA/DMF下环化生成卡贝缩宫素-氨基树脂,该片段经裂解(裂解试剂TFA:EDT:水=95:2.5:2.5)即可得到卡贝缩宫素粗肽。
发明内容
本发明提供了一种固相片段法合成卡贝缩宫素的方法,该方法的反应条件温和,收率高,单杂含量低,有利于实现规模化生产。xa0本发明的技术方案包括以下步骤:xa01.一种卡贝缩宫素的制备方法,其特征主要包括以下步骤:(1)以0.5-1.1xa0mmol/g王树脂为载体、Fmoc保护的氨基酸为单体,依次连接Fmoc氨基酸,以Fmoc-Tyr(OMe)-OH为终止氨基酸,得到Fmoc-Tyr(OMe)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Mmt)-树脂片段A。(2)A经脱Fmoc后,与溴代丁酸琥珀酰亚胺酯反应得到B;B在1%-5%的TFA/DCM作用下得到C;然后C在树脂上环化得到D;D以TFA/TIS/EDT为切肽试剂、在乙醚中沉淀形成E;xa0(3)以Rinkxa0amidexa0AM树脂为载体,Fmoc保护的氨基酸为单体,依次连接氨基酸,得到片段F;(4)E与F偶联得到G,G经裂解得到卡贝缩宫素粗品H;(5)将粗品溶于水,经过滤后通过制备HPLC进行分离纯化,得到卡贝缩宫素纯品。2.根据本发明所述的方法,以Fmoc保护的氨基酸为单体,依次与王树脂相连得到如式A的多肽树脂;采用偶联至多肽树脂上的缩合剂为下述缩合剂的一种或多种组合:DIC、HATU、TBTU、HBTU、PyBop、HOBt、Cl-HOBt、DIPEA、NMM、DIEA。xa03.根据本发明所述的方法,Cysxa0的侧链保护基为Mmt。xa04.根据本发明所述的方法,脱除Mmt保护基试剂为1%-5%TFA的DCM溶液。xa05.根据本发明所述的方法;H-Tyr(OMe)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Mmt)-树脂与溴代丁酸琥珀酰亚胺酯在选自由有机溶剂DCM,NMP和DMF组成的组中的至少一种溶剂中反应得到片段B。xa06.根据本发明所述的方法,环化反应在树脂上进行,所用的试剂为:二异丙基乙基胺,三乙胺,LiOH等。xa07.根据本发明所述的方法,采用E偶联至F肽树脂上的缩合剂为下述一种或多种组合:DIC、HATU、TBTU、HBTU、PyBop、HOBt、Cl-HOBt、DIPEA、NMM、DEPBT、DIEA。xa08.根据本发明所述的方法,以TFA/TIS/HAc为切肽试剂,其比例为90.0:5.0:5.0,最后在乙醚沉淀得到卡贝缩宫素的粗品H。xa09.根据本发明所述的方法,以C18柱为填料柱,通过制备HPLC进行分离纯化,流动相为硫酸铵的水溶液和乙腈的混合液,检测波长为280mm。xa0其中,化学物质A至H的化学结构如下所示:xa0ntent="drawing" img-format="jpg" inline="no" orientation="portrait" wi="612"/>ntent="drawing" img-format="jpg" inline="no" orientation="portrait" wi="616"/>该发明操作简单,产物的HPLC纯度大于99.0%,达到中国药典的要求。与传统的工艺中使用昂贵的原料Fmoc-2-氨基-3-(3-叔丁氧基羰基-丙基磺胺酰基)-丙酸)(Fmoc-2-amino-3-(3-tert-butoxycarbonyl-propylsulfanyl)-propionicxa0acid))比较,该发明采用Fmoc-Cys(Mmt)-OH为原料,通过片段合成法,使用价格相对便宜的Fmoc-Cys(Mmt)-OH巧妙地避开了专利保护的路线,是一条具有工业化生产应用前景的路线。xa0
附图说明
图1是本发明的卡贝缩宫素的LC-MSxa0图谱。xa0图2是本发明的卡贝缩宫素的HPLCxa0图谱。xa0
具体实施方式
按照本发明相关步骤如下:xa0(1)片段D的合成ntent="drawing" img-format="jpg" inline="no" orientation="portrait" wi="458"/>上述合成步骤中,“Fmoc-xa0Asn(Trt)-OH/TBTU/DIEA/HOBt”的表述意指,Fmoc-xa0Asn(Trt)-OH作为含肽原料是必须组分,“TBTU/DIEA/HOBt”的三者中选择其中至少一种。本文中,除非特别注明,否则并列的多种缩合剂或切肽试剂等的试剂均为选择其中至少一种;而含肽原料是必须组分。xa0(2)片段E和H的合成xa0ntent="drawing" img-format="jpg" inline="no" orientation="portrait" wi="377"/>其中,化学物质A至H的化学结构如下所示:ntent="drawing" img-format="jpg" inline="no" orientation="portrait" wi="620"/>ntent="drawing" img-format="jpg" inline="no" orientation="portrait" wi="615"/>实施例1(1)Fmoc-Cys(Mmt)-树脂的制备称取30g王树脂(0.50xa0mmol/g)置于固相反应器中,加入300xa0毫升的DMF溶胀约10分钟、抽干;加入18.5gxa0(30xa0mmol)xa0的Fmoc-Cys(Mmt)-OH,4.05gxa0(30xa0mmol)的HOBt,7.0xa0mL的DICxa0(45.0xa0mmol),183.2xa0mg的DMAPxa0(1.5xa0mmol),混合物常温震荡2.5-3小时,抽干反应溶液,用200毫升的DMFxa0洗涤3遍,然后用200毫升xa0吡啶/Ac₂O/DMF=xa06:5:50xa0(xa0v/v/v)溶液反应2小时。反应完毕,抽滤掉DMF,用DMF(250xa0毫升)洗涤3次,抽干。(2)Fmoc-xa0Asn(Trt)-Cys(Mmt)-xa0树脂的制备xa0加入约200xa0mL的20%的PIP/DMF溶液,室温震荡约5分钟;xa0再加入约200xa0mL的20%的PIP/DMF溶液,室温震荡约5分钟;抽干,用DMF洗涤3次,抽干,凯瑟测试(Kaiserxa0test)为(+),再用DCMxa0洗两遍,最后用DMF洗一遍。往合成管中加入200毫升的DMF。17.9xa0g的Fmoc-Asn(Trt)-OH(30xa0mmol),4.05gxa0(30xa0mmol)xa0的HOBt,7.0xa0mL的DICxa0(45.0xa0mmol)和100xa0mL的DMF加入烧杯中,混合溶解后,转入合成管中,鼓氮气下常温震荡2.5-3小时;DMF洗涤3次,抽干。凯瑟测试分析为(-)。(3)Fmoc-xa0Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Mmt)-xa0树脂的制备xa0加入约200xa0mL的20%的PIP/DMF溶液,室温震荡约5分钟,抽干;再加入约200xa0mL的20%的PIP/DMF溶液,室温震荡约10分钟,抽干;分别用DMF洗涤5次、DCMxa01次,DMF1次,抽干,凯瑟测试为(+),然后加入xa0200毫升的DMF;在烧杯中加入18.32g的Fmoc-Gln(Trt)-OHxa0(30xa0mmol),4.05gxa0(30xa0mmol)xa0的HOBt,7.0xa0mL的DICxa0(45.0xa0mmol)和100xa0mL的DMF加入烧杯中,混合溶解后,转入合成管中,混合物常温震荡2.5-3小时;DMF洗涤3次,抽干,凯瑟测试分析为(-)。(4)Fmoc-xa0Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Mmt)-xa0树脂的制备xa0加入约300xa0mL的20%的PIP/DMF溶液,室温震荡约5分钟,抽干;再加入约300xa0mL的20%的PIP/DMF溶液,室温震荡约5分钟,抽干;分别用DMF洗涤5次、DCMxa01次,DMF1次,抽干,凯瑟测试为(+),然后加入xa0200毫升的DMF。在烧杯中加入10.60xa0g的xa0xa0xa0Fmoc-Ile-OHxa0(30xa0mmol),4.05gxa0(30xa0mmol)xa0的HOBt,7.0xa0mL的DICxa0(45.0xa0mmol)和100xa0mL的DMF加入烧杯中,混合溶解后,转入合成管中,混合物常温震荡2.5-3小时。DMF洗涤3次,抽干,凯瑟测试分析为(-)。xa0(5)Fmoc-xa0Tyr(OMe)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Mmt)-xa0树脂的制备xa0加入约200xa0mL的20%的PIP/DMF溶液,室温震荡约5分钟,抽干;再加入约200xa0mL的20%的PIP/DMF溶液,室温震荡约10分钟,抽干;分别用DMF洗涤5次、DCMxa01次,DMF1次,抽干,凯瑟测试为(+),然后加入xa0200毫升的DMF。在烧杯中加入12.52xa0g的xa0xa0xa0Fmoc-Tyr(OMe)-OHxa0(30xa0mmol),4.05gxa0(30xa0mmol)xa0的HOBt,7.0xa0mL的DICxa0(45.0xa0mmol)和100xa0mL的DMF加入烧杯中,混合溶解后,转入合成管中,混合物常温震荡2.5-3小时。DMF洗涤3次,抽干,凯瑟测试分析为(-)。xa0(6)片段B的制备xa0加入约200xa0mL的20%的PIP/DMF溶液,室温震荡约5xa0分钟,抽干;再加入约200xa0mL的20%的PIP/DMF溶液,室温震荡约10分钟,抽干;分别用DMF洗涤5次、DCMxa01次,DMF1次,抽干,凯瑟测试为(+);加入xa0300毫升的DMF,然后加入4-溴代-丁酸2,5-二氧代-吡啶-1-基酯,反应结束后,抽干溶液,DMF洗5遍,DCM洗一遍。(7)片段D和E的制备xa0加入约300毫升的1-5%的TFA/DMF溶液,室温震荡约3小时,脱去半胱氨酸上的Mmt保护基,DMF洗涤5次,抽干;然后加入300毫升DMF,用DIEA条件溶液的碱性在9左右,用埃尔曼(Ellman)反应检测SH反应的情况,直到反应结束。用DMF洗3遍,DCM洗2遍。再往体系中加入TFA/TIS/EDT=180ml/10ml/10ml的裂解液,室温反应约3小时,过滤,滤液缓慢加入到无水乙醚中,然后过滤收集沉淀物,减压干燥后得到的粗品6.5xa0g粗产品E。(8)Fmoc-Gly-树脂的制备xa0称取20gxa0Rinkxa0amidexa0AM树脂(0.50mmol/g),置于固相反应器中,加入200xa0毫升的DMF溶胀约5xa0分钟、抽干;加入约200xa0毫升的20%的PIP/DMF溶液,室温震荡约10分钟,抽干;分别用DMF洗涤5次、DCMxa0洗涤1次,DMF1次,抽干;加入5.95g的Fmoc-Gly-OHxa0(20xa0mmol)、4.05xa0gxa0的HOBtxa0(30xa0mmol)、6.3xa0毫升的DICxa0(40xa0mmol)xa0和200毫升的DMF,混合物常温震荡2.5-3小时,DMF洗涤3次,抽干,凯瑟测试分析为(-)。(9)Fmoc-Leu-Gly-树脂的制备xa0加入约200毫升的20%的PIP/DMF溶液,室温震荡约5xa0分钟,抽干;加入约200xa0毫升的20%的PIP/DMF溶液,室温震荡约10分钟,抽干;分别用DMF洗涤5次、DCMxa0洗涤1次,DMF1次,抽干;xa0凯瑟测试为(+)。加入200毫升的DMF;加入10.06g的Fmoc-Leu-OH、(30xa0mmol)、6.3xa0毫升的DICxa0(40xa0mmol)xa0和50毫升的DMF,混合物常温震荡2.5-3小时,DMF洗涤3次,抽干,凯瑟测试分析为(-)。(10)Fmoc-Pro-Leu-Gly-树脂的制备xa0加入约200毫升的20%的PIP/DMF溶液,室温震荡约5xa0分钟,抽干,分别用DMF洗涤5次、DCMxa01次,DMF1次,抽干;凯瑟测试为(+)。加入200毫升的DMF;10.1g的Fmoc-Pro-OH、6.3xa0毫升的DICxa0(40xa0mmol)xa0和50毫升的DMF混合后溶解,再转入合成管中,混合物常温震荡2.5-3小时,DMF洗涤3次,抽干,凯瑟测试分析为(-)。(11)片段G的制备xa0加入约200xa0毫升的20%的PIP/DMF溶液,室温震荡约5min,抽干;再加入约200xa0毫升的20%的PIP/DMF溶液,室温震荡约10min,抽干;分别用DMF洗涤3次,DCMxa01次,DMF1次,抽干;凯瑟测试为(+)。往合成管中加入DMF200毫升;往烧杯中加入4.58xa0gxa0的DEPBTxa0(20xa0mmol),xa050xa0mlxa0DMF和3.4xa0ml的DIEA以及6.0克E,xa0然后转移到反应器中,混合物常温震荡2.5-3小时,DMF洗涤3次,抽干;(12)xa0片段H的制备加入TFA/TIS/HAc=140ml/8ml/8ml的裂解液,室温反应约3小时,过滤,滤液缓慢加入到无水乙醚中,然后过滤收集沉淀物,减压干燥后得到5.8xa0g的卡贝缩宫素粗品。(13)纯化xa0加入约10倍水溶解粗品,过滤后经制备HPLC纯化,填料为C18,流动相为0.1M(NH₂)₂SO₄:乙腈=4:1,流速为50ml/min,检测波长为280xa0nm,样品峰合并后,减压蒸馏溶剂、冻干得到3.3xa0g的成品。产物的总杂少于1.0%,单杂少于0.1%。其中,制备条件为以下所示:xa0柱子:Kromasilxa0C18,10um,50*250mmxa0波长:214nmxa0流速:100mL/minxa0流动相:xa0xa0xa0xa0xa0A:xa0H₂O+0.1%TFAxa0B:ACN+0.1TFAxa0梯度AB0 min 80%20%60 min35%65%60.1 min5%95%80 min5%95%以下是本发明涉及的化学品的全称及其来源:Fmoc芴甲基氧基羰基Wangxa0resin王树脂mmt4-甲氧基三苯甲基Trtxa0三苯甲基TFAxa0CAS:xa076-05-1xa0三氟乙酸DCMxa0CAS:xa075-09-2xa0二氯甲烷TISxa0CAS:xa06485-79-6xa0三异丙基硅烷HAcxa0CAS:xa064-19-7xa0乙酸DMFxa0CAS:xa068-12-2xa0二甲基甲酰胺DICxa0CAS:xa0693-13-0xa0N,N-二异丙基碳二亚胺HOBtxa0CAS:xa02592-95-2xa01-羟基-苯并三唑DMAPxa0CAS:xa01122-58-3xa04-(二甲基氨基)吡啶TBTUxa0CAS:xa0125700-67-6xa0O-苯并三氮唑-N,N,N",N"-四甲基脲四氟硼酸HATUxa0CAS:xa0148893-10-1xa02-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N",N"-四甲基脲六氟磷酸酯HBTUxa0CAS:xa094790-37-1xa0苯并三氮唑-N,N,N",N"-四甲基脲六氟磷酸盐PyBopxa0CASxa0128625-52-5xa0六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷Cl-HOBtxa0CASxa026198-19-6xa06-氯-1-羟基苯并三氮唑NMMxa0CAS:xa0109-02-4xa0N-甲基吗啉xa0DIEAxa0CAS:xa07087-68-5xa0二异丙基乙胺DIPEAxa0CAS:xa07087-68-5xa0二异丙基乙胺PIPxa0CAS:xa0110-89-4xa0哌啶Ac₂Oxa0CAS:xa0108-24-7xa0乙酸酐EDTxa0CAS:xa0540-63-6xa01,2-乙二硫醇DEPBTxa0CAS:xa0165534-43-0xa03-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮Fmoc-Cys(Mmt)-OHxa0CAS:177582-21-7xa0N-芴甲氧羰基-S-(4-甲氧基三苯甲基)-L-半胱氨酸Fmoc-Asn(Trt)-OHxa0CAS:132388-59-1xa0N-芴甲氧羰基-三苯甲基-L-天冬酰胺Fmoc-Gly-OHxa0CAS:29022-11-5xa0N-芴甲氧羰基-甘氨酸Fmoc-Tyr(OMe)-OHxa0CAS:77128-72-4xa0O-甲基-N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-L-酪氨酸Fmoc-Pro-OHxa0CAS:71989-31-6xa0N-芴甲氧羰基-L-脯氨酸Fmoc-Ile-OHxa0CAS:71989-23-6xa0N-芴甲氧羰基-L-异亮氨酸Fmoc-Cys(Trt)-OHxa0CAS:103213-32-7xa0N-芴甲氧羰基-S-三苯甲基-L-半胱氨酸另外,有关凯瑟测试的文献:E.xa0Kaiser,xa0R.xa0L.xa0Colescott,xa0C.xa0D.xa0Bossinger,xa0P.xa0I.xa0Cook,xa0Analyticalxa0Biochemistryxa034xa0595xa0(1970).有关埃尔曼反应的检测文献:Ellmanxa0GLxa0(1959).xa0"Tissuexa0sulfhydrylxa0groups".xa0Arch.xa0Biochem.xa0Biophys.xa082xa0(1):xa070–7.Wangxa0resinxa0王树脂供应商:天津南开合成科技有限公司Rinkxa0amidexa0AM树脂供应商:天津南开合成科技有限公司。